自Thomas Graham 1861年發明透析方法至今已有一百多年。透析已成為生物化學實驗室最簡便最常用的分離純化技術之一。在生物大分子的制備過程中,除鹽、除少量有機溶劑、除去生物小分子雜質和濃縮樣品等都要用到透析的技術。
透析原理
透析是指溶質在濃度梯度的驅使下,選擇性擴散通過半透膜,從而達到大/小分子分離,膜兩側濃度平衡。即小分子的溶質通過膜,而大分子物質不能通過,被截留在膜另一邊。
如果將樣品置于透析膜管內,通過置換膜管外部的透析緩沖液,就可將小分子物質基本清除,從而達到純化大分子物質的目的。最佳截留分子量(MWCO)取決于具體的應用。
透析袋應用
透析袋通常是由半透膜制成的袋狀容器。常應用于比如蛋白質和DNA的脫鹽濃縮,納米材料的篩選,中藥成分萃取后有機溶劑的去處等。
透析袋品牌
目前市場上主要透析袋品牌,亦默瑞主推品牌如下:
透析袋的分類
透析膜可用動物膜和玻璃紙等,但用的最多的還是用纖維素制成的透析膜。
1、生物技術纖維素酯(CE)膜
生物學惰性和超純的生物技術CE膜提供廣泛的可選孔徑(9種)和尺寸,用于帶電荷分子的分離及大分子純化。3種材質中,生物技術CE膜對條件及溶劑要求較高。一般而言,CE膜能夠抗弱的或稀的酸堿溶液和輕微乙醇,MWCO只有輕微改變。直接與有機溶劑接觸會破壞CE膜。生物技術CE膜只能在pH2-9與4-37℃下使用。即用透析裝置中也可使用CE膜。
2、生物技術再生纖維素(RC)膜
生物技術RC膜通過再生過程制得,物理抗性與化學相容性得到改良,具有與生物技術CE膜一樣高純度與均一的MWCO。RC膜能夠與高濃度的弱酸堿、低濃度的強酸堿、大多數醇類及一些溫和的或低濃度有機會溶劑共用,直接與強極性或有機會溶劑接觸會破壞RC膜。生物技術RC膜能在pH2-12與4-60℃條件下使用。
3、標準等級再生纖維素RC膜:Spectra/Por 1-7
標準等級再生纖維素(RC)由從棉毛纖維提取的天然纖維素構成,可廣泛應用于實驗室透析。這種透明、柔韌的膜孔徑均一且低廉、結實,非常適用于脫鹽、緩沖液置換、大分子純化及其他一般應用。由于具有廣泛的化學相容性,標準RC膜能夠與稀強酸堿液、高濃度的弱酸和弱堿、大多數醇類及一些溫和的或低濃度有機溶劑(包括DMSO)共用,但與一些強有機溶劑接觸可能會破壞RC膜,標準RC膜能夠在pH2-12和4-121℃條件下使用。
CE膜與RC膜的對比
名稱生物技術級纖維素酯膜(CE)生物技術級再生纖維素膜(RC)
膜類型對稱纖維素酯對稱再生纖維素
截留分子量0.1-0.5KD、0.5-1KD、3.5-5 KD、8-10KD、20KD、50KD、100KD、300KD、1000KD3.5-5KD、8-10KD、20KD
物理特性不透明、質地較硬不透明、柔軟
有機溶劑耐受性中等優良
扁平寬度10、16、24及31mm10mm和16mm
樣品容量范圍0.5ml到60ml0.5ml到30ml
pH值范圍2~92~12
建議的溫度極限37℃60℃
如何選擇透析袋
1透析袋命名
2 透析袋參數
*壓平寬度(MD),7-140mm;
*半周長;
*直徑;
*單位體積(裝載量)。
壓平寬度(MD)=π*直徑(R)/2=周長的一半,直徑(R)=2*壓平寬度(MD)/π
3 截留分子量
*定義
由于透析膜由海綿狀交聯聚合物組成,代表膜孔徑的截留分子量(MWCO)是一個間接衡量膜分離性能的參數。更準確的說,膜的截留分子量可定義為截留率至為少90%的溶質的分子量。
截留分子量為道爾頓,英文Da,簡稱D,1000Da=1KD
*?原則
由于溶質的滲透特性取決于分子形狀、水合化程度、離子電荷和極性,我們建議選擇截留分子量是被截留物質的分子量的一半/或是將要透過的物質的最大分子量的兩倍。
*截留分子量的分布
100Da-1000000Da
*型號選擇參考
100-500(100)
500-1000(500)
7000(6000-8000)
14000(8000-14000/12000-14000)
下期將為你逐一介紹默瑞透析產品暢銷品牌Spectrumlabs和Viskase,敬請關注。