mRNA疫苗體外合成解決方案

新冠mRNA疫苗制備流程：

1、mRNA體外轉錄  相關產品：T7 RNA Polymerase (貨號：E121)

高度特異識別T7啟動子

單次反應RNA產量可達100μg（模板僅需100ng）

可對低至1ng模板進行有效轉錄

Qubit數據顯示，Novoprotein試劑盒20ul轉錄體系產物磁珠純化后產量在100-150ug。

Qsep1結果顯示，體外轉錄得到的RNA完整性很好。

2、mRNA轉錄后修飾：加帽加尾

2.1、mRNA加帽(Cap0)   相關產品：Vaccinia Capping system (貨號：M062)        

高效完成mRNA加帽過程       

提高mRNA的穩定性，防止被RNA酶降解                                                           

提高mRNA的翻譯效率

2.2、mRNA加帽(Cap1)  相關產品：mRNA 2’-O甲基轉移酶 (貨號：M072)

高效完成RNA 5′ 末端緊鄰帽結構的第一個核苷酸的甲基化      

使帶帽 Cap 0甲基化為 Cap 1

提高 RNA 的翻譯效率

改善 mRNA 顯微注射和轉染后的表達

降低免疫原性

Cap1更不容易被機體免疫系統的RNA感受器識別，因此免疫刺激更低

2.3、mRNA加尾(PolyA)  相關產品： E. coli Poly(A) Polymerase (貨號：M012)

穩定mRNA的存在形式

引導轉錄終止

提高RNA在真核細胞中的翻譯效率

左邊novoprotein，右邊某品牌A

酶加量 1：0U；2：5U；3：1U；4：0.2U；5：0.04U；6：0.008U

3、其他輔助產品  

3.1、防止mRNA降解 相關產品：RNase抑制劑 (貨號：E125)

與RNase  A形成1：1復合體，對RNase 表現高度的非競爭性抑制，保護mRNA轉錄后不被降解

65℃保溫10min，40U酶活可保留一半以上，凍融10次酶活基本不受影響

3.2、降解模板DNA  相關產品：DNase I (貨號：E127)

可以將單鏈或雙鏈DNA同等程度進行隨機分解，生成具有5'-P末端寡核苷酸的脫氧核糖核酸。

mRNA轉錄結束后，消化模板DNA

同對照相比均能很好的去除RNA樣本中DNA殘留

3.3、增加mRNA產量  相關產品：無機焦磷酸酶 (貨號：M036)

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