目錄號：N259-YH01-01B

產品描述:

Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag)是一種新興的DNA-蛋白質互作研究方法。CUT&Tag以融合了protein A/G的Tn5轉座酶為核心，融合蛋白通過protein A/G與抗體結合，使得Tn5被栓系在靶位點周圍，從而在目的位點附近進行酶切反應，并同時引入二代測序所必需的接頭序列，產物DNA經過后續提取與PCR擴增后，得到直接用于測序的文庫。CUT&Tag與傳統的ChIP-Seq技術相比較，實驗不需要超聲打斷，也不需要傳統的連接法添加測序接頭，操作簡單、周期短、信噪比高、重復性好、細胞用量少，為極低起始細胞量和單細胞測序研究提供了可能性。

NovoNGS? CUT&Tag 3.0 High-Sensitivity Kit (for Illumina?) 試劑盒包含CUT&Tag實驗中孵育抗體、轉座體、構建文庫的相關試劑，可以用于組蛋白修飾和轉錄因子的染色質結合狀態研究。本試劑盒包含高活性的ChiTagTM  pAG-Tn5，相較于最初版本的pA-Tn5轉座酶，pAG結構域對兔、鼠等多種來源抗體具有廣譜的強親和性，在實驗抗體的選擇上具有更大的空間。

針對CUT&Tag打斷產物DNA提取過程中小片段丟失的問題，本試劑盒提供優化的Tagment DNA Extract Beads，相較于常規的片段分選磁珠可以完整的回收CUT&Tag產物中的小片段DNA，大大簡化了酚氯仿-乙醇沉淀法的繁瑣操作。此外，本試劑盒還提供了陽性抗體H3K4me3（兔抗）以及相應的二抗（羊抗兔IgG），用于陽性對照實驗（僅B包裝提供陽性抗體）。

產品用途：

DNA-蛋白質互作研究。在常見的哺乳動物細胞上用于替代傳統的ChIP-Seq 技術，特別適用于細胞數量較少的樣本，也可應用于經過處理的植物和酵母樣本上。 

基本原理：細胞被固定在刀豆蛋白磁珠（ConA磁珠）表面，然后加入洋地黃皂苷（digitonin）透化細胞膜，依次進行一抗、二抗、轉座體的孵育，隨后加入Mg2+激活轉座酶進行片段化反應，反應產物經過DNA提取、PCR富集完成二代測序文庫的構建。對于人源細胞常規的組蛋白修飾，僅需進行3-5M reads的測序量就能得到高分辨率的全基因組圖譜。

產品性能和應用實例：

■ ChiTagTM  pAG-Tn5的酶切活性：

■ 不同細胞數量樣本上的CUT&Tag結果：

■ 不同抗體的CUT&Tag結果：

■ 不同細胞系的CUT&Tag結果：

轉座體單鏈接頭序列：

Adaptor1: 5’-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3’

Adaptor2: 5’-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG -3’

ME: 5’-pCTGTCTCTTATACACATCT-NH2-3’

轉座體單鏈接頭序列：

5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC-Index2(i5)-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-xxxxxxxxx-CTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGAC-Index1(i7)-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’，其中-xxxxxxxxx-為插入序列,兩端為文庫結構。

參考文獻：

N6-methyladenosine modification of MALAT1 promotes metastasis via reshaping nuclear speckles[J]. Xinyu Wang et al. Developmental Cell. 2021.

The chromatin accessibility landscape reveals distinct transcriptional regulation in the induction of human primordial germ cell-like cells from pluripotent stem cells[J]. Xiaoman Wang et al. Stem Cell Reports. 2021.

Cellular senescence in hepatocellular carcinoma induced by a long non-coding RNA-encoded peptide PINT87aa by blocking FOXM1-mediated PHB2[J]. Xiaohong Xiang et al. Theranostics. 2021.

Gastrin, via Activation of PPARα, Protects the Kidney Against Hypertensive Injury[J]. Daqian Gu et al. Clinical Science. 2021.

Alpha‐fetoprotein accelerates the progression of hepatocellular carcinoma by promoting Bcl‐2 gene expression through an RA‐RAR signalling pathway[J]. Chao Zhang et al. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 2020.

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