1、GFP-Trap?可識別的 GFP 衍生物類型有哪些?

　　(1) eGFP, wtGFP, GFP S65T

　　(2) TagGFP

　　(3) eYFP, YFP, Venus, Citrin

　　(4) CFP

　　不能識別：TurboGFP，所有的 RFPs

　　2、RFP-Trap?可識別的 RFP 衍生物類型有哪些?

　　(1) mRFP

　　(2) mCherry

　　(3) mOrange

　　(4) mPlum

　　(5) mRuby

　　(6) mKate2

　　不能識別：DsRed、mRFPruby、TagRFP、所有 GFPs

　　3、Nano-Trap? (GFP-Trap? / RFP-Trap?) 的結合能力如何?

　　Nano-Trap?的結合能力取決于珠子。每 10μL 漿液，瓊脂糖珠可結合 2~3μg GFP，磁性顆?？山Y合 0.25-~0.5μg GFP。

　　4、可以從 GFP-Trap 洗脫結合蛋白么?

　　關于定量洗脫，可以將樣品至于 SDS 上樣緩沖液中 95℃煮 10min(詳見 protocol)，或者在 0.2 M 的 甘氨酸(pH2.5)中孵化 0.5~2min，隨后用 0.1 體積的 1M Tris 堿中和。

　　5、是否可以從 GFP-Trap 洗脫出自然狀態的結合蛋白，比如，在凝膠遷移實驗或功能分析實驗中?

　　可以嘗試洗脫游離的 GFP。但是，請注意，這種方法，不能定量洗脫出目標融合蛋白。

　　6、怎樣才能避免非特異性的蛋白與 GFP-Trap 交互作用而結合?

　　關鍵操作步驟，是在孵化液中稀釋洗滌劑的濃度。我們建議，洗滌劑為終濃度 0.1%(如 NP-40 或 TX-100)，

　　且最終體積不少于 0.4mL。另外，我們建議，要測定各種洗滌緩沖液的鹽濃度，使其范圍在 150mM-500mM

　　范圍內，以去除非特異性結合的親水性蛋白。

　　7、在 binding 過程中，N-端與 C-端 GFP 融合蛋白之間是否存在差異?

　　GFP-Trap?對 C-末端的 GFP 融合蛋白的親和力稍高，若要消除這種差異，可以加長孵化時間(1-2h 取 代 15-30min)

　　8、是否可以在組織樣品(即變性緩沖液)中直接純化 GFP 標記的融合蛋白?

　　原則上，GFP-Trap?即使在惡劣的緩沖條件下(如，RIPA 緩沖液，含 0.1%SDS 或 1M 尿素)，也非常 穩定。

　　9、可結合的 GFP-Trap?珠的 GFP 結構，是否有大小限制?

　　無。

　　10、如果在洗脫液中，有剩余的背景怎么辦?

　　建議使用 Chromotek 的 blocked particles(bab-20 or bmp-20)對樣品進行預處理。