工作原理
Amaxa?Nucleofector?技術(shù)是 Lonza(原Amaxa)公司的專利創(chuàng)新技術(shù)，它綜合應(yīng)用傳統(tǒng)的電穿孔技術(shù)及細(xì)胞特異性細(xì)胞核轉(zhuǎn)染液，通過(guò)調(diào)整優(yōu)化的電轉(zhuǎn)參數(shù)(內(nèi)存轉(zhuǎn)染程序)，直接把外源基因?qū)朐?xì)胞及細(xì)胞系的細(xì)胞漿和細(xì)胞核中。它不同于傳統(tǒng)的電穿孔儀，因?yàn)樗梢园淹庠椿蛑苯訉?dǎo)入核中，而且細(xì)胞存活率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于電穿孔儀。
Nucleofector 技術(shù)是獨(dú)一無(wú)二的，因?yàn)樗梢灾苯訉NA轉(zhuǎn)染到細(xì)胞核內(nèi)，因此實(shí)現(xiàn)了因受到細(xì)胞分裂限制而一直困擾人們的原代細(xì)胞的高效率轉(zhuǎn)染。在 Nucleofector核酸轉(zhuǎn)染儀的幫助下，您可以在腫瘤研究、免疫學(xué)、組織工程學(xué)及心血管疾病研究領(lǐng)域中輕而易舉地獲得大于90%的高效率基因轉(zhuǎn)染率。Nucleofector 核酸轉(zhuǎn)染技術(shù)特別適用于轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞和難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系，如T細(xì)胞及PC-12細(xì)胞系等。
Nucleofector試劑盒包含兩個(gè)溶液：Nucleofector溶液和添加劑。兩者都是針對(duì)每個(gè)細(xì)胞類型來(lái)特異開(kāi)發(fā)的。它們?cè)诤宿D(zhuǎn)染過(guò)程中提供了細(xì)胞友好的環(huán)境，支持DNA直接到達(dá)細(xì)胞核。Nucleofector溶液只與Nucleofector裝置共同使用時(shí)，才能發(fā)揮作用。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
1.不依賴細(xì)胞的有絲分裂，適用于懸浮細(xì)胞、原代細(xì)胞等難轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
2. 高轉(zhuǎn)染效率，直接將外源基因轉(zhuǎn)入核內(nèi)。
在某些細(xì)胞中Nucleofector的轉(zhuǎn)染效率可以達(dá)到90%，與病毒感染同樣有效。Nucleofector直接將DNA運(yùn)送到細(xì)胞核中，因此，基因表達(dá)就可以立即開(kāi)始，數(shù)小時(shí)內(nèi)就可以完成轉(zhuǎn)染和分析的全過(guò)程，對(duì)于細(xì)胞系來(lái)說(shuō)2-6小時(shí)就可以分析，對(duì)于原代細(xì)胞則需要4-16小時(shí)。
3.可轉(zhuǎn)染DNA、RNA或siRNA。
4.操作簡(jiǎn)單方便，Nucleofector轉(zhuǎn)染技術(shù)操作不到1小時(shí)就能完成。
5.最廣泛細(xì)胞類型，全球共享的細(xì)胞轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)庫(kù)不斷擴(kuò)大。目前已有1200余種細(xì)胞系高效轉(zhuǎn)染，130余種原代細(xì)胞成功轉(zhuǎn)染。
6.維持細(xì)胞生理功能。
Nucleofector 細(xì)胞核轉(zhuǎn)染技術(shù)操作步驟
整個(gè)操作過(guò)程只需四步，非常簡(jiǎn)單、高效。
第1步：處理細(xì)胞，精確計(jì)數(shù)
第2步：混合DNA、轉(zhuǎn)染液，重懸細(xì)胞，加入轉(zhuǎn)染杯
第3步：將轉(zhuǎn)染杯放入轉(zhuǎn)染儀，按鍵選擇相應(yīng)程序，按"start"鍵開(kāi)始轉(zhuǎn)染，10秒鐘左右
第4步：取出細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)
外源基因直接導(dǎo)入核內(nèi)。Normal human dermal fibroblasts –neonatal were nucleofected with 2.5 μg TMR-labeled plasmid DNA encoding eGFP. Fixation of cells was performed after 2 hours with 3.5 % PFA. TMR label is shown in (A), GFP fluorescence in (B), DAPI nuclear staining in (C) and a merge of all three fluorescent labels in (D).
最廣泛細(xì)胞類型的高效轉(zhuǎn)染
