TwistDx 開發的核酸恒溫擴增技術稱為重組酶聚合酶擴增 (RPA) 技術，實現了便攜式的快速核酸檢測，是可以替代聚合酶鏈反應 (PCR) 技術的高度多用型技術。RPA 應用范圍廣泛，包括傳染病診斷和食品污染測試等，極其適用于現場檢測、醫院的床邊診斷和其他可以資源極少的應用，特別是亟需快速得出結果的情況。RPA 易于運輸、使用簡單并且高度靈敏，其特異診斷能力可與 PCR 擴增媲美，但速度快得多，通常可在 3-10 分鐘內生成結果。與 PCR 不同，RPA 反應不需要熱溶解或化學溶解，因此不需要昂貴的熱循環儀或任何其他設備或試劑。

　　RPA 對操作溫度的要求特別寬松。該反應在 37-42?C 左右的溫度下最有效，該溫度范圍低于其他恒溫方法，但在更大的室溫范圍下也將有效。呈凍干形態時，RPA 試劑在室溫下具有通常至少長達 12 個月的高度穩定性*。短期運輸無需冷藏。而且，凍干試劑微球的工作流程簡單，無需專業培訓。

　　RPA 在很多應用中可替代 PCR。最終用戶可輕易地使用其自己的引物設計出自己的超靈敏檢測方法。可對 RPA 技術進行調整，使其適合各種微流體、橫向流動和其他裝置，且通過將逆轉錄酶加入反應混合液，RPA 技術還可用于擴增和檢測 RNA。

　　我們的客戶告訴我們該技術非常有效。

　　RPA 的工作原理

　　RPA 反應利用被稱為重組酶的酶，這些酶與寡核苷酸引物形成復合體，并使引物與雙鏈 DNA 中的同源序列配對。單鏈 DNA 結合 (SSB) 蛋白與被取代的 DNA 鏈結合，并使形成的 D 環保持穩定。然后從引物啟動由聚合酶介導的 DNA 擴增，但前提是存在靶標序列。一旦啟動，擴增反應將快速進行，因此開始時只需一點靶標 DNA 拷貝數，高特異性 DNA 擴增在數分鐘內即可達到可檢出水平。

　　為什么選擇重組酶聚合酶擴增?

　　速度

　　RPA 非常快速，在 37-42°C 這一通常最適宜的反應溫度下，只需少量核酸分子即可在 3-10 分鐘(通常)內擴增至可檢出水平，但這將取決于靶標大小。在大部分情況下，只需要一個人即可在半小時內采集樣本、制備樣本、運行檢測并取得結果，并且無需專業培訓。相比之下，現行的慣例是臨床樣本必須送往中心實驗室進行處理，且周轉時間為 24 小時。

　　靈敏度

　　RPA 可檢測復合樣本中的單拷貝 DNA 和十拷貝或更少 RNA，而無需預先純化核酸。

　　特異性

　　RPA 具有高度特異性，該技術可從可能含有數百納克來自多個不同物種的不相關復合基因組 DNA(包括人 DNA)的樣本中檢測并擴增單個 DNA 分子。

　　低溫運行

　　RPA 在恒定的低溫(37-42°C 最適宜)下運行，無需在起始時溶解樣本 DNA。對于某些應用，如果需要，即便體溫也可支持 RPA 擴增。該反應在偏離溫度及低溫設置下也表現穩健，即使在常規室溫 25°C 下也將奏效，雖然反應速度會下降;在此溫度下，只要此生物化學過程被正確配置，仍可在一小時內獲得結果。

　　樣本容差

　　RPA 對樣本類型的要求特別寬松，有時可直接檢測未經核酸純化的復合樣本，例如血液、鼻拭子或培養基。通常，只需采用基本的病原體裂解方法處理樣本以釋放核酸即可，例如熱處理或弱堿處理。每種檢測所需的最合適的樣本制備方法取決于病原體滴定度、是否存在抑制劑以及裂解要求等因素，并將需要設計到檢測程序中。RPA 對某些復合樣本類型的穩健性使該技術在原則上可能非常適合廣泛的現場和床邊應用。

　　廣泛的適用性

　　RPA 能夠方便地應用于任何 DNA 或 RNA 靶標。有最終用戶報告稱，通過將逆轉錄酶添加到反應混合液中開發出了超高靈敏度的 RNA 一鍋檢測法。

　　多重

　　通過將多種引物同時添加到同一反應管中，單次 RPA 測試即可擴增和檢測多種不同的靶標。

　　低成本

　　RPA 僅需要基本的檢測設備，也就是說，最終用戶可以使用我們的產品開發出適合各種應用和環境的人性化診斷方法和試劑盒。

　　靈活的試劑形態

　　核心反應組分能夠以穩定的干燥形態供貨，該形態易于運輸，且無需冷藏即可儲存最多 12 個月(穩定性可能因用途不同而有變化，因此仍建議在冷藏條件下長期儲存);也能夠以 PCR 試劑更常見的液體形態供貨，該形態允許用戶針對特定的應用改變反應體積和組分比例。

　　多種檢測形式

　　RPA 可應用于各種檢測系統和儀器，包括實時熒光探針和夾心法等形式。