TwistDx推出了一系列全新的液態重組酶聚合酶擴增 (RPA)試劑盒
作者：Morey 發布時間：2020-01-13 點擊次數：3138
近期，TwistDx推出了一系列全新的液態重組酶聚合酶擴增 (RPA)試劑盒，這些試劑盒非常適合需要不使用熱循環儀就能在15分鐘內完成 DNA/RNA 擴增的實驗室以及想要靈活構建試驗體系的研究人員使用。
TwistAmp??Liquid試劑盒提供經甘油穩定化處理的液態RPA試劑，該形態對于在實驗室執行
PCR
和其他基于酶的反應的任何人來說都非常熟悉。這些試劑各自裝于單獨的試管中，用戶可隨意從中移取任何量的酶混合液來構建自己所選的RPA反應體積，配制用于多次反應的預混液，或者以各種
RPA 組分比例進行實驗以優化試驗。
除了具有室溫穩定性的凍干態TwistAmp?
RPA試劑盒這一旗艦產品，本次新推出的?TwistAmp?
Liquid試劑盒是現場或定點試驗開發的理想之選。液體形態讓實驗室更容易地在日常工作中使用快速簡單的RPA法（該方法有時甚至采用與PCR相同的引物）取代 PCR法，以及更容易地開發出定制的試驗。
產品組成:
TwistAmp
Basic Kit（凍干態） | TwistAmp
Basic Kit(液態) NEW!!! |
● 96
freeze-dried RPA pellets ● 4
x 1 ml TwistAmp? Rehydration buffer ● 1
x 250μl magnesium acetate (280mM) ● 6μl of
Control template ● 45μl of
Control primer mix | ● 50μl
20x Core Reaction Mix ● 3ml
2 x Reaction Buffer ● 500μl
280mM MgOAc ● 550μl
10 x E-mix ● 100μl
of Positive control template ● 45μl
of Positive control oligo mix |
相關擴展試劑盒額外提供試劑:
◆ 100
μl 50x 外切酶 III (TwistAmp? Liquid exo/exo RT kits);
◆ 100
μl 50x 逆轉錄酶 (RT) (TwistAmp? Liquid Basic RT/exo RT kits);
◆ 100
μl of 陽性對照模板 (DNA with TwistAmp? Liquid exo/Basic kits, RNA with TwistAmp?
Liquid Basic RT/exo RT kits);
◆ 45
μl of 陽性oligo mix (oligo mix consists of primers for Basic/Basic RT kits,
primers plus a ?uorescently labelled exo probe in the exo/exo RT kits)
其他必需試劑(非試劑盒提供):
◆ ddH2O;
dNTPs; 寡聚核苷酸; RNase抑制劑(僅用于RT試劑盒)
產品信息:
貨號 | 品名 | 規格 |
TALQBAS01 | TwistAmp Liquid Basic Kit | 100 rxn以上 |
TALQBASRT01 | TwistAmp Liquid Basic RT Kit | 100 rxn以上 |
TALQEXO01 | TwistAmp Liquid Exo Kit | 100 rxn以上 |
TALQEXORT01 | TwistAmp Liquid Exo RT Kit | 100 rxn以上 |
附:
TwistAmp liquid試劑盒Q&A
Q
20x核心反應mix有沉淀,是否影響其功能?
A在低溫保存時,
重組酶和輔助蛋白在50%甘油中20x核心反應mix中有時會發生可逆的共沉淀反應.所以在室溫融化混勻后離心使其返回溶液形式并不影響其功能。
Q
使用Liquid試劑盒做多重實驗，能否制備master mix?
A
可以。Oligos, 2x Reaction Buffer, water, dNTPs and 10x
E-mix可以預先混合，置于冰上幾個小時，在很多實例中可以過夜保存（性能上有任何改變都需要客戶自行實驗和評價）。一旦加入20x核心酶，短期保存在冰上也是可以的。
Q
使用Liquid試劑盒如何提高重復率和RNA模板的擴增率?
A
先將RNA模板和醋酸鎂混合后加入反應體系中，RNA的三級結構會抑制逆轉錄酶的活性，所以加入RNA和醋酸鎂時，將兩者分別加到在管內壁兩側或者將醋酸酶加在管內蓋中，同時離心混入體系，這種操作會提高反應性能。
Q
在TwistAmp Liquid E-mix中有沉淀，還能使用嗎?
A
可以。少量磷酸肌酸會發生沉淀不會影響RPA反應，只需在實驗前通過渦旋將沉淀重懸離心即可。
Q
在使用Liquid試劑盒時，是否能夠使用dUTP/生物素（酰）化dUTP?
A
可以，請參考
Q
最小的RPA液體反應體系是多少?
A
最小低至PL級，請參考
Q
液體反應體系中需要加入多少dNTPs?
A
1.8mM(總)dNTPs 作為起始量即可。用戶也可以根據自身實驗優化濃度,有時1-12mM均適用。
Q
如何提高擴增曲線的可重復性?
A
優化擴增曲線考慮以下因素:
對于低拷貝數模板，不穩定擴增可能是因為達到檢測限或者是反應混勻程度不同（未混勻的反應擴增效率不佳）。另外，在低溫情況下存貯，重組酶和輔助蛋白在50%甘油情況下形成沉淀,也是可能導致不穩定擴增的原因。所以，20x核心反應mix在室溫下解凍并震蕩渦旋將使其成為液體，不影響其功能,并且有效提高擴增效率。不穩定擴增也可能是因為master
mix量不足，在加入體系前，用戶必須保證震蕩后20x核心反應組分均一。
