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默瑞新聞
重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)–核酸擴(kuò)增的另一種選擇
作者:Morey 發(fā)布時(shí)間:2018-12-11 點(diǎn)擊次數(shù):5062

TwistDx 的重組酶聚合酶擴(kuò)增 (RPA) 將徹底改變?cè)谫Y源有限的現(xiàn)場環(huán)境中擴(kuò)增和檢測核酸的能力。

公司背景

  TwistDx Inc. 由分子生物學(xué)家兼蛋白生物化學(xué)家 Niall Armes 博士以及 Derek Stemple 博士和 Nagesh Mahanthappa 博士于 1999 年共同創(chuàng)立,其總部位于美國馬薩諸塞州劍橋市。TwistDx Limited 于 2002 年成立,其公司位于英國劍橋,2010年被IVD行業(yè)POCT巨頭美艾利爾Alere收購,Alere在2017年4月被雅培Abbott收購。

RPA技術(shù)原理


  RPA 體系的重點(diǎn)是重組酶,這些酶與寡核苷酸引物形成復(fù)合體,并使引物與雙鏈 DNA 中的同源序列配對(duì)。單鏈 DNA 結(jié)合 (SSB) 蛋白與被取代的 DNA 鏈結(jié)合,并使形成的 D 環(huán)保持穩(wěn)定。然后從引物啟動(dòng)由聚合酶介導(dǎo)的 DNA 擴(kuò)增,但前提是存在靶標(biāo)序列。一旦啟動(dòng),擴(kuò)增反應(yīng)將快速進(jìn)行,因此開始時(shí)只需一點(diǎn)靶標(biāo)DNA 拷貝數(shù),高特異性 DNA 擴(kuò)增在數(shù)分鐘內(nèi)即可達(dá)到可檢出水平。

RPA循環(huán)


  RPA 的技術(shù)特點(diǎn)

  為什么選擇RPA方法?

  速度

  RPA 非常快速,在 37-42°C 這一通常最適宜的反應(yīng)溫度下,只需少量核酸分子即可在 3-10 分鐘(通常)內(nèi)擴(kuò)增至可檢出水平,但這將取決于靶標(biāo)大小。在大部分情況下,只需要一個(gè)人即可在半小時(shí)內(nèi)采集樣本、制備樣本、運(yùn)行檢測并取得結(jié)果,并且無需專業(yè)培訓(xùn)。

  靈敏度

  RPA 可檢測復(fù)合樣本中的單拷貝 DNA 和10拷貝甚至更少 RNA,而無需預(yù)先純化核酸。

  特異性

  RPA 具有高度特異性,該技術(shù)可從可能含有數(shù)百納克來自多個(gè)不同物種的不相關(guān)復(fù)合基因組 DNA(包括人 DNA)的樣本中識(shí)別并擴(kuò)增單個(gè) DNA 分子,抗干擾能力強(qiáng)。

  恒溫運(yùn)行

  RPA 在恒定的低溫(37-42°C 最適宜)下運(yùn)行。對(duì)于某些應(yīng)用,如果需要,即便體溫也可支持 RPA 擴(kuò)增。該反應(yīng)在偏離溫度及低溫設(shè)置下也表現(xiàn)穩(wěn)健,即使在常規(guī)室溫 25°C 下也將奏效,雖然反應(yīng)速度會(huì)下降;在此溫度下,只要此生物化學(xué)過程被正確配置,仍可在一小時(shí)內(nèi)獲得結(jié)果。

  樣本容差

  RPA 對(duì)樣本類型的要求寬松,有時(shí)可直接檢測未經(jīng)核酸純化的原始樣本,例如血液、鼻拭子或培養(yǎng)基。通常,只需采用基本的病原體裂解方法處理樣本以釋放核酸即可,例如熱處理或弱堿處理。每種檢測所需的最合適的樣本制備方法取決于病原體滴定度、是否存在抑制劑以及裂解要求等因素,并將需要設(shè)計(jì)到檢測程序中。RPA 對(duì)某些復(fù)合樣本類型的寬容性使該技術(shù)在原則上非常適合廣泛的現(xiàn)場和床邊應(yīng)用。

  廣泛的適用性

  RPA 能夠方便地應(yīng)用于任何 DNA 或 RNA 靶標(biāo),無序列偏好性,這一點(diǎn)對(duì)于NGS尤其重要。如果將逆轉(zhuǎn)錄酶添加到反應(yīng)混合液中開發(fā)出了超高靈敏度的 RNA 一步檢測法。

  多重檢測

  通過將多種引物同時(shí)添加到同一反應(yīng)管中,單次 RPA 測試即可擴(kuò)增和檢測多種不同的靶標(biāo)。

  低設(shè)備成本

  RPA 僅需要基本的檢測設(shè)備,也就是說,最終用戶可以使用我們的產(chǎn)品開發(fā)出適合各種應(yīng)用和環(huán)境的人性化診斷方法和試劑盒。

  靈活的試劑形態(tài)

  核心反應(yīng)組分能夠以穩(wěn)定的干燥形態(tài)供貨,該形態(tài)易于運(yùn)輸,且無需冷藏即可儲(chǔ)存最多 12 個(gè)月(穩(wěn)定性可能因用途不同而有變化,因此仍建議在冷藏條件下長期儲(chǔ)存),也能夠以 PCR 試劑更常見的液體形態(tài)供貨,該形態(tài)允許用戶針對(duì)特定的應(yīng)用改變反應(yīng)體積和組分比例。

  多種檢測形式

  RPA 可應(yīng)用于各種檢測系統(tǒng)和儀器,包括實(shí)時(shí)熒光探針和夾心法等形式。

RPA 與 其他核酸擴(kuò)增方法PCR及LAMP的比較



設(shè)備和配件

 

T16-ISO Instrument

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T16-ISO 是一款在適宜的恒定溫度下可進(jìn)行下一代診斷性 DNA/RNA 擴(kuò)增的高級(jí)恒溫儀器,這一緊湊、低成本、獨(dú)立、靈敏的儀器適合實(shí)地和床邊診斷應(yīng)用。

Product: T16Device

Features

最多容納 2 排(每排 8 支)標(biāo)準(zhǔn) 0.2 mL PCR 試管

每個(gè)試管三通道熒光檢測*

對(duì) RPA 反應(yīng)進(jìn)行磁力混合(需要在 RPA 反應(yīng)混合物中加入微珠)

儀器可配置為獨(dú)立運(yùn)作或連接 PC 模式

便于使用高級(jí)桌面軟件進(jìn)行研究應(yīng)用

觸摸屏 LCD,圖形用戶界面可實(shí)現(xiàn)高級(jí)工作流程管理

可互換的模塊化光度頭,可配置為多通道

試驗(yàn)溫度范圍為 37?C 到 65?C

體積小巧,適合臺(tái)式和實(shí)地應(yīng)用

USB 和以太網(wǎng)連接可提供數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)傳輸和 LIS 集成

靈活的試驗(yàn)曲線創(chuàng)建和高級(jí)數(shù)據(jù)顯示與導(dǎo)出

隨附攜帶箱和軟件

 

T8-ISO Instrument

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高級(jí) T8-ISO 儀器是一款緊湊、獨(dú)立、高靈敏度的下一代分子檢驗(yàn)儀器,適合實(shí)驗(yàn)室和實(shí)地應(yīng)用。T8-ISO 儀器是一款可測量兩種熒光團(tuán)的便攜式儀器:FAM? 和 ROX? 或其他具有相似光譜的熒光團(tuán)。
本儀器僅適合作研發(fā)之用,未針對(duì)特定檢測方法和應(yīng)用進(jìn)行進(jìn)一步測試和認(rèn)證,不適合作體外醫(yī)療診斷 (IVD) 之用。

Features

體積小巧,適合臺(tái)式和實(shí)地應(yīng)用

可容納 8 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的 0.2 ml 試管

支持重組酶聚合酶擴(kuò)增 (RPA)

對(duì) RPA 反應(yīng)進(jìn)行磁力混合(需要在 RPA 反應(yīng)混合物中加入微珠)

每個(gè)試管雙通道熒光檢測

便于使用高級(jí)桌面軟件進(jìn)行檢測配置管理和導(dǎo)出

大尺寸 4.3 英寸觸摸屏 LCD,可供查看單個(gè)圖形

圖形用戶界面可實(shí)現(xiàn)高級(jí)工作流程管理

試驗(yàn)溫度范圍為 37?C 到 65?C

USB 和以太網(wǎng)連接可提供數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)傳輸和 LIS 集成選項(xiàng)

提供選配的外置電池 - 訂單

提供選配的攜帶箱 - 訂單

 

PCRD Nucleic Acid Detection(50 件/包)

被稱為 PCRD 的核酸側(cè)向?qū)游雒庖邫z測 (NALFIA) 可用于取代 DNA 瓊脂糖膠電泳。PCRD 只需 10 分鐘即可檢出成功擴(kuò)增的靶標(biāo) DNA 序列,是希望快速獲取結(jié)果的繁忙實(shí)驗(yàn)室的理想之選。
PCRD 是替代瓊脂糖膠電泳的快速、安全且經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的檢測方法,可與重組酶聚合酶擴(kuò)增 (RPA) 結(jié)合使用。

Product code: PCRD3Kit

Features

兩條檢測線(外加質(zhì)控線)可實(shí)現(xiàn)多個(gè)分析物的檢測

與 TwistAmp? nfo 試劑盒完全兼容

絕佳的信噪比

容易使用

在 10 分鐘內(nèi)給出結(jié)果

無需擴(kuò)增后純化或雜交

 

U-Star Disposable Nucleic Acid Detection Device

一次性核酸檢測設(shè)備隨附抗體夾心法免疫層析試紙條。檢測在密封盒內(nèi)進(jìn)行,以防擴(kuò)增產(chǎn)物交叉污染。只需 1-2 分鐘的準(zhǔn)備,將試管放入盒內(nèi)之后 10-15 分鐘內(nèi)出結(jié)果。相比傳統(tǒng)的電泳,本產(chǎn)品是一種快速、防交叉污染、無毒性且免儀器的核酸擴(kuò)增產(chǎn)物檢視方法。

Features

每包 20 套

非常容易使用

無需使用儀器

在盒內(nèi)密封反應(yīng)管后 15 分鐘內(nèi)出結(jié)果

包含擴(kuò)增子容器,非常適合實(shí)地使用

可根據(jù)要求單套銷售。


Milenia Genline HybriDetect 1 (100 件/包)

Milenia Genline HybriDetect 1 橫向流動(dòng)試紙條可用于檢測在 TwistAmp??nfo 試劑盒與 TwistAmp? nfo 探針及帶標(biāo)記擴(kuò)增引物結(jié)合使用下生成的擴(kuò)增產(chǎn)物。Milenia Genline HybriDetect 1 橫向流動(dòng)試紙條可以檢測帶生物素標(biāo)記的擴(kuò)增子。擴(kuò)增后,可將產(chǎn)物稀釋、涂點(diǎn)到試紙條樣本墊并在緩沖液中運(yùn)行數(shù)分鐘,隨后如果檢測線上有金離子聚集則表明存在特異性擴(kuò)增子。雖然最初是為 PCR 應(yīng)用而開發(fā),本產(chǎn)品在與 RPA 系統(tǒng)結(jié)合使用時(shí)無需擴(kuò)增后純化或雜交即可得出極佳的結(jié)果。橫向流動(dòng)試紙條能夠以便利的免儀器方式進(jìn)行檢測,在某些環(huán)境中可能是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。
Product code: MILENIA01

Features

每盒包含 100 個(gè)專門為 RPA 客戶生產(chǎn)的試紙條

無需擴(kuò)增后純化或雜交

無需使用儀器

一條檢測線(外加質(zhì)控線)可實(shí)現(xiàn)單個(gè)分析物的檢測

與 TwistAmp? nfo 試劑盒完全兼容

默瑞生物

       默瑞(上海)生物科技有限公司是Chromotek品牌的中國總代理。默瑞擁有兩個(gè)產(chǎn)品部,儀器部和試劑部。

  儀器部主要產(chǎn)品有:Leica顯微系統(tǒng),Merk Millipore實(shí)驗(yàn)室純水超純水儀及配套耗材,Tecan酶標(biāo)儀、液體工作站,Roche實(shí)時(shí)定量PCR儀、DNA測序儀、核酸純化,Partec流式細(xì)胞儀,IKA桌面小儀器,Miele清洗機(jī),UniEquip凍干機(jī)和層析冷柜等。

  試劑部主要產(chǎn)品有: TwistDx恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒,Echelon酯類研究試劑,Jackson ImmunoResearch抗體,MTI-GlobalStem細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑,ChromoTek標(biāo)簽抗體, Horizon Discovery測序標(biāo)準(zhǔn)品和細(xì)胞,Enzymatics二代測序酶, BiosPacific抗體抗原,bioWORLD植物生長劑,Nanocs PEG修飾劑,Spectrumlabs透析袋,Brighter Ideas熒光蛋白,Lumiprobe熒光染料,Polysciences微球,Emfret心血管疾病研究抗體, Iduron糖胺聚糖產(chǎn)品,JenaBioscience分子試劑,eENZYME病毒研究工具等。

免費(fèi)熱線電話:4006-400-850

Sales QQ:2885337893


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