相關背景：

　　隱孢子蟲(Cryptosporidium Tyzzer,1907)為體積微小的球蟲類寄生蟲。廣泛存在多種脊椎動物體內，寄生于人和大多數哺乳動物的主要為微小隱孢子蟲(C.parvum)，由微小隱孢子蟲引起的疾病稱隱孢子蟲病(cryptosporidiosis)，是一種以腹瀉為主要臨床表現的人畜共患性原蟲病，被世界衛生組織(WHO)列為世界六大腹瀉病之一。自1976年在美國首次發現人體感染隱孢子蟲病例以來，目前該病已遍及除南極洲外的90多個國家，300多個地區。發達國家隱孢子蟲陽性率為0.6%～20%，發展中國家為4%～32%，我國于1987年在南京首次報道2例人體感染病例，此后陸續在江蘇、安徽、山東、湖南、云南、黑龍江、河南、上海等省(直轄市、自治區)均有隱孢子蟲感染的報道，感染率為1.33%～13.49%。

　　文章概述：

　　作為隱孢子蟲病檢測金標準的分子診斷技術PCR,只適合于實驗室檢測，需要昂貴的溫度循環儀，而且商業化核酸提取試劑盒步驟多，操作繁瑣，并不適用于現場快速檢測工作的進行。基于此，建立一種操作簡單，快速，高效的檢測方法對于隱孢子蟲屬檢測工作意義重大。有研究發現，通過加入0.1%十二烷基肌氨酸鈉的沸水可以使隱孢子蟲卵囊中DNA釋放出來，稱為LLS法。因此本文作者利用熱水法(LLS)分離奶牛糞便中DNA，并且通過膠體金試紙條結合RPA技術(LF-RPA)快速檢測臨床樣本中的隱孢子蟲。

　　1 通過不同時間和孵育溫度下LF-RPA擴增反應顯示： LF-RPA擴增體系在不同溫度(30-45℃)下，10min之內便能達到顯著的檢測效果。

　　2 通過多種寄生性原生蟲屬和陰性對照樣本測試LF-RPA反應顯示：LF-RPA反應引物和探針系統表現出高度特異性。

　　3 通過臨床樣本靈敏度試驗顯示，LF-RPA檢測靈敏度能達到0.5 oocysts/reaction，遠高于巢式PCR的10 oocysts/reaction，并且不受PCR抑制劑的影響。

　　值得注意的是，由于RPA反應的高靈敏性，容易發生交叉污染，所以實驗操作過程中使用的手套，管子，槍頭必須保證無菌，操作區在使用前必須進行紫外處理;另外長時間(30min)將LF試紙條檢測留在PBST緩沖液中會產生假陽性，但通過將擴增子1:100稀釋(而不是1:50稀釋)將有效的解決這個問題。總而言之，本文建立一種高靈敏性和高特異性的，低成本的，快速檢測糞便中隱孢子蟲屬的新方法，為預防和控制隱孢子蟲病，開發臨床診斷試劑盒提供一種新的思路。

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